It was possible to standardize a procedure which combined an indirect microELISA assay with a standard curve and that allowed to estimate the titre of IgG antibodies to Adenovirus in samples of human serum, using only one dilution of these. Based on the end-point titre previously determined for a panel of 117 serum samples, we selected 90 of these samples (r² = 0,98) to build 4 standard curves that related the natural logarithm of the fluorescence responses to the natural logarithm of the end-point titre for a wide range of serum dilutions (1:40=1:320). It was selected the curve corresponding to serum dilution 1:40 (r² = 0,81), which made possible an optium utilization of those accessories designed to handle the volumes in the ultramicro range and, therefore, the automation of the whole procedure. The results obtained as regards the complement fixation test (100 % of sensitivity and 97,3 % of specificity) support the use of this method in our laboratory as a complementary tool to carry out seroepidemilogical studies on a large scale and with diagnostic ends.

Se logró normalizar un procedimiento que combinaba un ensayo de ultramicroELISA indirecto con una curva patrón y que permitió estimar el título de anticuerpos IgG a Adenovirus en muestras de suero humano utilizando una sola dilución de éstos. Basándose en el título a punto final previamente determinado para un panel de 117 muestras de suero, se seleccionaron 90 de éstas (r² = 0,98) para construir 4 curvas patrones que relacionaron el logaritmo natural de las respuestas de fluorescencia y el logaritmo natural del título a punto final para un rango amplio de diluciones del suero (1:40 hastra 1:320). Se seleccionó la curva correspondiente a la dilución 1:40 del suero (r² = 0,81), la cual posibilitó una óptima utilización de los accesorios diseñados para la manipulación de los volúmenes en el rango ultramicro y, por tanto, la automatización de todo el procedimiento. Los resultados obtenidos con respecto a la técnica de fijación del complemento (100 % de sensibilidad y 97,3 % de especificidad) respaldan la utiización de este método como una herramienta complementaria en la ejecución de estudios seroepidemiológicos a gran escala y con fines diagnósticos.

Using as a reference the strain 44/93 isolated during the neuropathy epidemy in 1991 and characterized as a producer of a light cytopathic effect (L-CPE), it was possible the standardization of an ELISA for the fast identification of other strains with similar effect. The assay consisted in a sandwich-type ELISA where the conditions selected for each reactive (10 mug/mL for the coating antibody, 1 mg/mL for the antigen, and dilution 1/2 000 for the conjugate) allowed to have an adequate discrimination between the antigen and the antigen control for the reference strain used. The evaluation of a panel of reference viral strains and of other L-CPE-producing strains showed a 100 % of coincidence between this method and the isolation in cellular culture. The results obtained permit us to recommed the use of this assay as a more precise alternative to identify these agents.

Utilizando como referencia la cepa 44/93 aislada durante la epidemia de neuropatía en Cuba en 1991 y caracterizada como productora en cultivo celular de efecto citopático ligero (ECP-L), se logró la normalización de un ELISA para la identificación rápida de otras cepas con similar efecto. El ensayo consistió en un ELISA tipo sandwich donde las condiciones seleccionadas para cada reactivo (10 myg/mL para el anticuerpo de recubrimiento, 1 mg/mL para el antígeno y dilución 1/2 000 para el conjugado) permitieron una adecuada discriminación entre el antígeno y el control de antígeno para la cepa de referencia empleada. La evaluación de un panel de cepas virales de referencia y de otras cepas productoras de ECP-L, mostró un 100 % de coincidencia entre este método y el aislamiento en cultivo celular. Los resultados obtenidos nos permiten recomendar la utilización de este ensayo como una alternativa más precisa en la identificación de estos agentes.

Se presentan los resultados del estudio de validación del ensayo ultramicroanalítico de detección de anticuerpos contra el antígeno de superficie de la hepatitis B (UMELISA anti-HBsAg), que se realizó comparando los resultados obtenidos, con el juego diagnóstico comercial Hepanostika anti-HBsAg. Se utilizaron para ello sueros procedentes de los ensayos clínicos de la vacuna recombinante cubana contra la hepatitis B. Con el primer panel de sueros (n = 300) se obtuvo el 93,1 % de sensibilidad, el 98,5 % de especificidad y una concordancia del 94,3 %. El coeficiente de correlación indicó una tendencia similar de los resultados (p < 0,01) y no se encontraron diferencias significativas en el título promedio geométrico (TPG) entre ambos ensayos (p 0,05). Con el segundo panel (n = 100), realizado en el Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" (IPK) y el Centro de Inmunoensayo (CIE) simultáneamente, se obtuvo una sensibilidad del 96,25 % en ambos centros, una especificidad del 75 % en el IPK y del 90 % en el CIE y una coincidencia del 92 y 95 %, respectivamente. El coeficiente de correlación mostró valores similares y no hubo diferencias significativas entre las TPG alcanzadas por los 2 métodos (p 0,05). Los resultados obtenidos en general muestran la validez del nuevo ensayo y la factibilidad de su utilización en la práctica, ya sea para el seguimiento de la infección o para la realización de ensayos clínicos de evaluación de vacunas.

Durante 1993, nuestro país se vio afectado por un brote de neuropatía epidémica (NE) caracterizado por 2 formas clínicas fundamentales: óptica y periférica. Aunque la causa de la enfermedad fue considerada multifactorial (fundamentalmente agentes neurotóxicos y deficiencia nutricional), fue aislado un Enterovirus del líquido cefalorraquídeo de un paciente (cepa 47/93, IPK), el cual fue posteriormente clasificado como Coxsackie A9 (Cox A9) mediante la prueba de neutralización (Nt) utilizando los pools de suero de Lim Benyesh Melnick (LBM). Se presentan los resultados obtenidos durante la aplicación del ELISA y del ultramicroELISA en la identificación de este agente a partir del sobrenadante de cultivo de células infectadas, así como en la detección de anticuerpos a la cepa en poblaciones con baja y alta incidencias de la enfermedad.

We have standardized an indirect ultramicro ELISA assay for detecting antibodies to human Cytomegalovirus (CMV) using human serum samples (UMELISA CMV). The optimal concentration of coating antigen (30 ug/ml), serum dilution (1:40) and anti-human conjugate working dilution (1:1500), were determined by a check board titration method. The UMELISA CMV was compared with the latex agglutination test for antibodies to CMV (Dupont de Nemours) and with an indiret immunofluorescent method. The results have showed the high coincidence, sensitivity and especificity of the proposed assay regarding the two methods compared with, and supporting its use either for a blood donors screening or in the serological diagnosis of this infection by paired serum samples.

Se normalizó un ultramicroELISA indirecto para la detección de anticuerpos a Citomegalovirus (CMV) humano (UMELISA CMV). Se determinó la concentración óptima de antígeno en 30 ug/ml, la dilución de los sueros fue de 1:40 y la dilución de trabajo del conjugado fue de 1:1500. El UMELISA CMV fue comparado con las técnicas de aglutinación de latex para anticuerpos anti-CMV (Dupont de Neumors) y la inmunofluorescencia indirecta (EFT). Los resultados mostraron un alto grado de concordancia y elevada copositividad y conegatividad del UMELISA con respecto a estos dos ensayos. El método es válido para el pesquisaje de anticuerpos en banco de sangre asi como para el diagnóstico de la infección mediante sueros pareados.